#8: アトピー性皮膚炎の病態を空間的に捉える
こんにちは。ミロ@miro_bipolarです。
本日は以下の論文を紹介していきたいと思います。
（オープンアクセスなので無料で読めます）
概要
慢性炎症性疾患では、豊富で異質な免疫細胞が病変に浸潤し、これらの細胞を特徴付ける必要がある。
これにより、疾患を促進する免疫細胞と関与しない免疫細胞を区別することが可能となる。
本研究では、空間トランスクリプトミクスを用いて非伝染性炎症性皮膚疾患（ncISD）のランドスケープを調査し、31人の患者から得られた62,000の空間的に定義された人間の皮膚トランスクリプトームの大規模なリポジトリを作成した。
期待される免疫細胞の浸潤にもかかわらず、我々は病原性の疾患を促進するサイトカイントランスクリプト（IFNG、IL13、およびIL17A）が比較的少ないことを観察した。
つまり、病変皮膚断片全体の平均発現と比較して125倍以上少ない。
それにもかかわらず、サイトカイン発現は病変皮膚に制限され、疾患固有のパターンで提示される。
密度ベースの空間クラスタリング法を活用して、サイトカインの直接の近くに特定の応答遺伝子の特性を同定し、検出されたサイトカイントランスクリプトが、局所の微小環境で数千に及ぶ特定の応答遺伝子トランスクリプトの増幅カスケードを開始することを確認した。
したがって、ncISDの豊富で異質な浸潤の中で、わずかなサイトカイントランスクリプトとそれらの翻訳された蛋白質のみが、局所の微小環境で炎症性増幅カスケードを開始することによって疾患を促進すると考えられる。
背景
非伝染性炎症性疾患（ncISD）は、遺伝的背景と環境トリガーの複雑な相互作用に基づいており、これによって免疫応答が変化します。
いくつかの百種類以上のncISDが存在し、その中には扁平苔癬（lichen planus、LP）、アトピー性皮膚炎（atopic dermatitis、AD）、および乾癬（psoriasis）が含まれます。
これらは異質であるが、ほとんどのncISDは、異なるリンパ球サブセットと上皮との相互作用に基づく適応免疫経路に従って分類できます。
乾癬はクラシカルなタイプ3免疫細胞介在疾患を表し、アトピー性皮膚炎は主にタイプ2免疫に支配され、扁平苔癬はタイプ17免疫細胞によって支配されています。
それに応じて、乾癬はタイプ3免疫のサイトカインであるIL-17AやIL-23を標的とする抗体によって効果的に治療できます。
同様に、アトピー性皮膚炎はIL-13などのタイプ2免疫細胞のサイトカインを標的とする抗体で成功裏に治療されています。
しかし、治療応答を予測するモデルがないため、多くの患者は特定の治療に反応しないことがあります。
さらに、現行の治療法はサイトカインを中和しますが、抗原特異性を標的としていないため、治癒的なアプローチが不足しています。
サイトカイン分泌免疫細胞のプロファイル、動態、および空間分布に関するもっと精緻な情報が必要です。
新しい分子技術を使用すると、ncISDの関連する細胞タイプをシングルセルおよび空間コンテキストで深層フェノタイピングできます。
従来のシングルセルシーケンシング技術では、組織の解離が必要であり、組織の文脈が失われる可能性があるため、解釈にバイアスがかかることがあります。
空間トランスクリプトミクス（ST）はこの問題を克服し、炎症性皮膚の構造を研究できますが、シングルセルの分解能ではありません。
本研究では、10X GenomicsのVisium技術を使用してncISDの病変および非病変皮膚における適応免疫応答を空間的に解明します。
我々は、LPの場合のIFNG、ADの場合のIL13、および乾癬の場合のIL17Aといった疾患を促進するサイトカインの単一トランスクリプトが、それぞれの疾患病態の特有の炎症性応答遺伝子の局所の増幅カスケードを開始することを観察します。
したがって、豊富で異質な浸潤の中でわずかな免疫細胞がncISDを促進しています。
結果
皮膚空間トランスクリプトームのベンチマーキング
非病変および病変のncISD皮膚の病原性微小環境を解析するために、我々はncISD（図1a）の空間トランスクリプトミクスのランドスケープを特徴付けました。
これにはLP、AD、および乾癬が含まれます。
遺伝子発現は、10X GenomicsのVisium技術を使用して凍結およびH&E染色された皮膚断片で測定されました。
生成されたデータセットには90のサンプル（31の病変、14の非病変が重複している）が含まれ、62,968のスポットのトランスクリプトームがありました。
一意の分子識別子（UMI）のカウントが1未満で、ミトコンドリアの割合が25％を超える3649のスポットを削除した後（方法を参照）、15,285の非病変スポットと44,034の病変スポットがさらなる分析に進みました。
我々は、ヒトの皮膚における中枢性疾患サイトカインを産生する白血球の空間的な分布と機能に洞察を与える2つの補完的な解析ワークフローを提案しました。
図のパネルでは簡略化のためにIL17Aを参考モデルとして描いています。
最初のワークフローは、サイトカイントランスクリプト陽性の白血球スポットの空間的な位置を特定し、これらの空間的な特徴を使用してサイトカイントランスクリプト陽性対サイトカイントランスクリプト陰性の白血球を含むスポットの差異遺伝子発現（DEG）解析を行い、その後、パスウェイの豊富な解析を行います。
2番目のワークフローでは、サイトカイントランスクリプト陽性の白血球スポットにラベルを付け、次に密度ベースのクラスタリング法を使用して、空間的な特徴に基づいてサイトカインと応答遺伝子署名を相関させます。
この解析により、単一のサイトカイントランスクリプトが組織の微小環境で数千の特定の応答遺伝子トランスクリプトの増幅カスケードを開始するという驚くべき観察が得られました。
我々はこれらの結果を、in situハイブリダイゼーション、シングルセルおよびバルクシーケンシング、免疫組織化学、FACS測定、および細胞培養解析など、さまざまな患者コホートと手法を用いて検証しました。
疾患を促進するサイトカイントランスクリプトの数は少ない
ncISDにおける組織炎症の重要な駆動要因であるサイトカインの主要なエフェクターサイトカインであるIFNG、IL13、およびIL17Aの発現を、空間的な解像度で調査しました。
全体の断片を考慮に入れると、IFNG、IL13、およびIL17Aに対してそれぞれ434、144、および224のUMIカウントが検出され、すべての病変断片でそれぞれ372、103、および154の空間スポットに分布していました。
一般的に、対応するサイトカイントランスクリプトはすべてのサンプルで均等に分布せず、特にADは異質であることが示されました。
非病変皮膚サンプルでは、サイトカインUMIカウントが低いことが予想され、IFNG、IL13、およびIL17Aに対してそれぞれ平均UMIカウントが1、1、および0であることが観察されました。
しかし、病変ncISD皮膚でも、IFNG、IL13、およびIL17Aに対するトランスクリプトは1から37、1から12、および1から27の範囲で検出されました。
UMIカウントが1未満および/またはミトコンドリアの割合が25％を超えるスポットが品質管理手順で削除された場合、サイトカイントランスクリプト陽性のスポットが削除された可能性があるため、これらのスポットを再分析しました。
サイトカイン陽性のスポットはこれらの手順で取り除かれていないことが示されました。
サイトカイン陽性のスポットを薄くしないようにするために、ダブルポジティブのスポットも分析に含めましたが、これらは少数派を表しています。
すべての他の遺伝子の平均に対して、非病変および病変皮膚においてIFNG、IL13、およびIL17Aの合計で、それぞれ900倍および125倍も発現が少ないことが確認されました：これはヒトの皮膚におけるサイトカインの希少な存在を強調しています。
それらの頻度が低いにもかかわらず、空間的な分布は調査されたサイトカインにとっては特異的でした。IFNG（基底層表皮+真皮1 vs 上層+中間層表皮+真皮2-7 p = 1.66e−22）およびIL13（中間+基底層表皮+真皮1および真皮2 vs 上層表皮+真皮3-7 p = 2.41e-17）は、下位の表皮層および上位の真皮層に有意に豊富でしたが、IL17Aは病変表皮の全層で検出され、真皮ではほとんど発現していませんでした（表皮対真皮 p = 2.96e−13）。
我々はin situ hybridizationを使用してSTデータセット全体で低いトランスクリプト数および低いサイトカイントランスクリプト陽性のスポット数を確認しました。
in situ hybridizationでは非常に少数のサイトカイントランスクリプト陽性のシグナルが検出されました。
IFNG、IL13、およびIL17A mRNAのセクションごとの中央値のトランスクリプト陽性細胞数は、それぞれLP、AD、および乾癬で83、4、および11であり、これはST解析からの観察を確認しています。
同様に、乾癬のシングルセルRNASeq解析も、IFNGまたはIL17Aトランスクリプト陽性の細胞あたりのトランスクリプトが少ないことを示し、CD4+細胞あたりのIFNGまたはIL17Aの中央値UMIカウントが1、CD8+細胞あたりのIFNGまたはIL17Aが4であることがわかりました。
また、バルクRNAシーケンシングを使用して、ncISD患者の大規模なコホートも調査しました。
ここでは、6 mmの皮膚パンチ生検の1/3で、非病変および病変LP皮膚においてIFNGのバイオプシーあたりの中央値がそれぞれ1および25.5であることが検出されました。
ADでは、IL13のバイオプシーあたりの中央値が2および4.5、乾癬ではIL17Aのバイオプシーあたりの中央値が0および7.5でした。
皮膚浸潤T細胞の免疫組織化学およびフローサイトメトリー解析では、病変皮膚においてサイトカイン陽性リンパ球の数は同様でした（組織学：13.3％のIL-17A陽性リンパ球、フローサイトメトリー：4.2％のCD4+IL-17A+、4.9％のCD8+IL-17A+）。
時間経過解析では、in vitroでの短時間のT細胞受容体（TCR）刺激が、10～30分でピークとなり、総生産時間が<6時間である一時的なmRNA産生をもたらしたことが示されました。
細胞あたりのmRNAトランスクリプトの数は、長時間のTCR刺激で増加しました。
UMIカウントが低いにもかかわらず、サイトカインは空間的な解像度で疾患特異的な発現パターンを示しました。
IFNGトランスクリプトは主に病変LPで発現しており（中央値/セクション：4）、ADおよび乾癬ではIL13（中央値/セクション：1.5）およびIL17A（中央値/セクション：9）がそれぞれ発現しており、上位の皮膚層で強調された発現が見られました。
この明確な分布パターンは、他の疾患駆動サイトカイン、IL17F、IL21、IL22、TNF、IL10、およびIL4にも当てはまりました。
シグネチャサイトカインの相対的な分布は、LPがタイプ1、ADがタイプ2、および乾癬がタイプ3の免疫駆動疾患であることを確認しています。
これらの結果はまとめると、炎症した皮膚には疾患特異的なサイトカイントランスクリプトの少数が存在し、特有の組織分布を示しています。
サイトカイントランスクリプト陽性のスポットおよび近くのスポットは、特定の遺伝子発現シグネチャで特徴づけられる
これらのサイトカイントランスクリプト陽性のスポットのフェノタイピングを行うために、サイトカイントランスクリプト陽性対サイトカイントランスクリプト陰性のスポットの差異遺伝子発現（DEG）解析を行いました。
特に免疫細胞に焦点を当てるために、スポットは白血球マーカー（CD2、CD3D、CD3E、CD3G、CD247（CD3Z）、またはPTPRC（CD45））に基づいて事前にソートされました。
これらのマーカーの少なくとも1つのUMIカウントの存在は、白血球陽性のスポットと見なされました。55µmの各スポットのサイズにより、DEGは一般的に、サイトカインを産生する細胞および与えられたサイトカインに応答する細胞から派生した遺伝子を表示しました。
55 µMの直径を持つスポットは複数の細胞を含む可能性があるため、Tangramを使用してサイトカイントランスクリプト陽性の白血球スポットの細胞組成を予測し、あるスポット内の細胞タイプの予測空間地図を生成しました。
ここで、Tangramは代表的なSTセクションにおいて、T細胞および先天性免疫細胞のさまざまなレベルを主要なサイトカイン産生者として示しました。
これに従い、IFNGトランスクリプト陽性のスポットは、GZMB、FASLG、CD70、CXCR3、およびCXCR6などのタイプ1免疫細胞に関連する遺伝子、およびCXCL9、CXCL10、CXCL11などの上皮細胞でIFNGによって誘導される遺伝子と特徴付けられました。
IL13トランスクリプト陽性のスポットは、IL2、IL10、SLAMF1などのタイプ2細胞に関連する遺伝子と、CCL17、CCL22、MMP12、OSMなどの組織応答と関連する遺伝子を持つ異なる発現シグネチャを示しました。
IL17Aトランスクリプト陽性のスポットに関連する遺伝子には、IL17F、IL22、IL26があり、皮膚でIL17Aによって誘導される遺伝子（例：IL19、NOS2、S100A7A、DEFB4A、CXCL8、IL36G）が含まれています。
STが免疫細胞由来の遺伝子とそれらに相関する組織応答を同定する能力は、リードサイトカイントランスクリプト陽性のスポットの遺伝子セットエンリッチメント解析によってさらに示され、これにより炎症駆動細胞シグナリングと炎症に対する組織反応の両方の特異的なシグネチャが明らかにされました。
要するに、我々は病変皮膚においてサイトカイントランスクリプト陽性のスポットを定義する遺伝子シグネチャを特定し、空間的な解像度が免疫細胞由来の遺伝子だけでなく、それらが引き起こす組織反応も理解するのに役立つことを示しました。
サイトカイントランスクリプト数と免疫応答は空間的に相関している
病変の非伝染性皮膚疾患（ncISD）の皮膚で観察されるわずかなサイトカイントランスクリプトにおける観察された機能的な関連性をさらに調査するために、サイトカイントランスクリプトとその周囲のスポットで誘導された応答との相関を調査しました。
各サイトカインに対する特定の応答シグネチャを確認するため、サイトカインは主に表皮で発現していたことを考慮し、in vitroでリコンビナントIFN-γ、IL-13、またはIL-17Aで主細胞のヒト角質形成細胞を刺激し、異なる発現遺伝子（DEG）を取得するために遺伝子発現アレイを実施しました。
これらのDEGをlog2FCとp値でフィルタリングした後、遺伝子リストは各サイトカインの空間的に導出されたDEGリストと比較され、IFN-γ（29遺伝子）、IL-13（4遺伝子プラス10文献に基づく遺伝子）、およびIL-17A（21遺伝子）の特定の応答シグネチャが提供されました。
特定された応答遺伝子はデータセット全体に均等に分布しており、IFNG、IL13、およびIL17Aの合計よりも270倍多く発現していました。
最初に、これらの応答遺伝子のカウントは、空間的な分解能を考慮に入れずにすべての表皮STセクションでそれに対応するサイトカインのカウントと相関させました。
IFNGはその応答遺伝子と強い相関を示しました（加重スピアマンr = 0.62；p = 3.54e−10）、一方でIL13およびIL17Aはそれぞれの応答遺伝子と低い正の相関を示しました（加重スピアマンr = 0.39；p = 3.42e−4およびr = 0.22；p = 4.74e−2）。
次に、空間的な情報がサイトカインおよび応答トランスクリプトの相関を向上させるかどうかに興味がありました。
したがって、空間情報を使用する密度ベースのクラスタリング方法を開発しました。
サイトカイントランスクリプトの存在をその応答遺伝子と同じスポット（半径0）または隣接するスポット（半径1-9）と相関させることで、各サイトカインの異なる半径の作用を特定できました。
IL17Aは直接周囲（半径0）で最も強い効果を示し、IFNGの効果は調査されたすべての半径でかなり安定しており、半径4でピークを迎えました。
IL13の作用は半径3で最大になり、それ以上の半径では減少しました。
次に、各サイトカインの最適な作用半径を特定し、サイトカインおよび応答トランスクリプトの相関を調査するために、この特定された最適な作用半径を使用し、密度クラスタリング方法を活用しました。
密度ベースのクラスタリングはIFNG（加重スピアマンr = 0.73；p = 1.5e−10）、IL13（加重スピアマンr = 0.57；p = 1.3e−3）、およびIL17A（ピアソンr = 0.83；p = 9.13e−21）において炎症性微小環境におけるサイトカインと表皮組織反応の相関を著しく向上させました。
驚くべきことに、わずか1から15（IFNG：1から8、IL13：1から3、IL17A：1から15 UMI counts/spot）のサイトカイントランスクリプトを有するごくわずかなスポットでも、周囲のスポットで最大25,000の応答トランスクリプトを誘導でき、これはサイトカイン信号の莫大な増幅を示しており、それによって組織の炎症も増幅されています。
さらに、密度ベースのクラスタリング方法が新しいサイトカイン特異的な応答遺伝子を識別するのに挑戦できるかどうかについても検討しました。
これについて、各分類された作用半径のいずれにも該当しないエピダーマスのサイトカイントランスクリプト陽性スポットと、それ以外のすべてのスポットとを比較するDEG解析を実施しました。
log2FCカットオフが1より大きく、padj値が0.05未満の場合、これによりIFNG関連の974、IL13関連の148、およびIL17A関連の228の上昇したDEGが特定されました。
これにより、SRGN、LYZ、CCL17、CLEC10A、GM2Aなどの新しいサイトカイン-遺伝子関連をデータ駆動で拡張しました。
要約すると、より多くのサイトカイントランスクリプトがある領域は、サイトカイントランスクリプトのない領域または少ない領域と比較して、より高い応答シグネチャを有していました。
したがって、空間情報と密度ベースのクラスタリングの組み合わせは、すべてのサイトカインとそれらの応答シグネチャに対して生物学的な信号を向上させました。
これらの結果は、サイトカイントランスクリプトを発現する細胞とそれらが引き起こす組織反応との関係について包括的な洞察を提供し、低いトランスクリプト数でも皮膚で病原性免疫応答を誘導するのに十分であるという私たちの仮説を確認しています。
議論
一般的な炎症性皮膚疾患の治療法は非現実的であると思われてきました。
なぜなら、これらの疾患は通常、多様で豊富な免疫細胞が病変皮膚に浸潤しているからです。
しかし、新しい分子技術とバイオインフォマティクスツールにより、ncISDを新しいレベルで解析し、治療法の開発の初歩的なステップを踏むことが可能になりました。
ここでは、私たちは空間分解能を用いてncISDを調査しました。
具体的には、DEG解析を用いて分子的な景観を探索し、サイトカイントランスクリプトがその周囲の環境に与える影響を調査するためのアルゴリズムを開発しました。
我々は、少数の免疫細胞がncISDの病理を積極的に進行させ、シグネチャサイトカイントランスクリプトの少数しか産生しないことを実証しました。
実際に、これらわずかなサイトカイントランスクリプトは、炎症性反応遺伝子の数千倍の誘導をもたらし、それにより炎症性の微小環境を形成し、結果として組織損傷と病理を引き起こします。
我々の分析は主にSTに基づいており、これにより炎症性皮膚疾患を患う患者の病変および非病変の両方の皮膚サンプルのユニークなデータセットが生成されています。
STは長時間の消化手順に依存せずに空間情報を保持するため、機能的な単位が区別可能な皮膚などの組織系において非常に有益です。
基本的に、STは複雑な組織の相互作用の文脈で全トランスクリプトームシーケンシングデータを調査するための研究機会を提供し、皮膚の炎症のアーキテクチャを調査するのに役立ちます。
サイトカイントランスクリプトが炎症性皮膚でまれであるにもかかわらず、これらは疾患および空間固有のパターンで検出されました。
分布はncISDで以前に記載された抗原と一致しています。
例えば、乾癬では、サイトカイントランスクリプト陽性の白血球はほぼ完全に表皮全体に見られ、乾癬の表皮およびメラノサイト抗原（ADAMTSL5、LL37など）が発現している場所です。
対照的に、LPで報告された抗原は基底表皮と上部真皮の境界に位置しており、例えばDSG2などのHom s蛋白質（？）が表れ、これが白血球の活性化を引き起こす可能性があります。
私たちの結果は、最近の研究が炎症性皮膚でサイトカインmRNA陽性の細胞を調査し、それが主に表皮で発現し、CD3発現と共局在することを強調している点を裏付けています。
炎症性皮膚でのサイトカイントランスクリプトの組織応答プロファイルを理解するために、我々は組織アノテーションを共変量として実装することで、組織依存の方法でこれらを特徴づけました。
空間的な文脈では、エピテリウムでのIL17A、IL17F、およびIL26によるタイプ3免疫応答の信頼性のある応答シグネチャを同定しました。
これにより、酸化ストレスマーカーであるNOS2、好中球の移動に寄与するCXCL8、および抗菌ペプチドであるS100A7AやDEFB4Aなどが誘導されました。
対照的に、タイプ1免疫のマーカーはCXCL925、CXCL10、および細胞毒性マーカーでした。
タイプ1 ncISDにおけるIFN-γ媒介のアポトーシスおよびネクロプトーシスの役割は、IFNG陽性のスポットでのFASLおよびGZMBの発現によってよく確立されています。
タイプ2免疫はエピテリウム応答のシグネチャが最も定義されておらず、主にCCL17、CCL19、およびCCL22などのタイプ2を引き付けるケモカインから構成されていました。
このシグネチャは、IL4トランスクリプトがADの病変皮膚でもほぼ検出されないため、IL13によって排他的に媒介されました。
サイトカイントランスクリプトのわずかな数が、レスポンダートランスクリプトの大規模な増幅カスケードの基盤を構築しているという洞察は、現在のところ、シグネチャサイトカイン自体よりも応答遺伝子がncISDの診断や治療診断の堅牢なバイオマーカーとして提案されている理由を説明しています。
これには、NOS2とCCL2726,27を使用した乾癬および湿疹の鑑別診断のための分子分類子、血清中のIL-19レベルによる乾癬に対する抗IL-17療法の応答の予測、およびDEFB4AまたはCCL17/TARCといったものがあります。
疾患を駆動する免疫細胞とそれらの同位体抗原を確実に特定することは、ncISDの治療法の道を切り開くかもしれません。
例えば、抗原固有の免疫療法などが試みられていますが、湿疹では全体的な戦略としては控えめな臨床的有効性しかありません。
これはおそらく、抗原特異性の疾患駆動免疫細胞のエンドタイプを識別する必要があるためで、これはこの異質な疾患内で定義されています。
ncISDの治癒療法が可能であることの原則の証明は、自己免疫性の水疱性疾患である天疱瘡バルガリスで行われました。
ここでは、原因となる抗原であるデスモグレイン3（DSG3）はほとんどの患者で同一であり、したがって全患者グループに対するターゲット治療法の設計が可能です。
実際、Dsg3特異的な細胞を中和する改変CAR T細胞アプローチは、印象的で持続的な臨床的改善をもたらしました。
我々の密度ベースのクラスタリング手法は、サイトカイントランスクリプト陽性のスポットを中心にクラスタを配置し、それに応じて各組織スライスにおいてin vitroでの表皮刺激に基づいて考慮されるサイトカイン特異的なレスポンダーシグネチャの半径を最適化しました。
これにより、検出されたトランスクリプトが直接の周囲に与える影響を分析し、サンプルサイズやサイトカインの異種性の数に依存しない、特定の空間相関を計算することが可能になりました。
病変皮膚のバルクおよび単一細胞シーケンシングは、わずかな数のサイトカインが炎症を引き起こす可能性があり、これは空間的な文脈でのサイトカイントランスクリプトとレスポンダージーンの相関の観察によってさらに裏付けられています。
クラスタリング手法は、レスポンダーシグネチャを調整する際に、表皮から真皮へと一般化することができ、他の疾患や組織にも適用できます。
将来的には、我々の手法はバイオマーカーや疾患駆動因子を同定するために活用できます。
同様に、データ駆動型のサイトカイン応答遺伝子の詳細な評価は、異なる応答シグネチャを純化するための次のステップとなります。
連続した組織切片を用いて三次元の空間情報を統合することで、アルゴリズムは同じ患者の異なる組織切片全体で疾患を駆動するネットワークをより良く特定できるように改良できるでしょう。
精密医療のための青写真は、最近のがん医学の進展で見出されます。
通常、悪性黒色腫などの腫瘍は数千の異なる突然変異で特徴づけられています。
しかし、それらのうちわずかなものが実際には腫瘍の成長と転移をもたらすドライバー変異です。
これらのドライバー変異を特異な標的小分子で標的化することにより、悪性黒色腫患者の生存率は著しく向上しました。
ここで、我々は炎症性皮膚疾患との類似性を示しています。
非サイトカイン産生の免疫細胞は無関係な傍観者細胞と見なされ、一方でサイトカイン産生の免疫細胞を標的にすることがncISDの効果的で可能性のある治療法となる可能性があります。
前提条件は、これらの細胞を炎症性微小環境に局在させ、疾患駆動免疫細胞が反応する特定の抗原を同定することです。
これがncISDの精密医療への道を切り開く可能性があります。
私見
はい、今回もなかなかのボリュームの論文でした。
総じてサイトカインをはじめとする生理活性物質は、絶対的な発現量が低いといわれており、この論文もそれを反映したものと思われました。
それにしても、そのような感度の悪いデータでも、ここまでの結論を見出せていることは脱帽です。。はっきり言って、ネガティブデータを論文としてまとめるようなものなので。
ご質問・コメントはコメ欄もしくはX(@miro_bipolar)まで。
